三級(jí)甲等綜合醫(yī)院國(guó)營(yíng)
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(一)簡(jiǎn)單定性中和試驗(yàn):
本法主要用于檢出病料中的病毒,亦可進(jìn)行初步鑒定或定型。先根據(jù)病毒易感性選定試驗(yàn)動(dòng)物(或雞胚、細(xì)胞培養(yǎng))及接種途徑。將病料研磨,并稀釋成一定濃度(約100LD50~1000LD50或TCID50)。污染的病料需加抗生素(青霉素、鏈霉素各200~1000單位),或用細(xì)菌濾器過濾,與已知的抗血清(適當(dāng)稀釋或不稀釋)等量混合,并用正常血清加稀釋病料作對(duì)照。混合后置37℃1h,分別接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,每組至少3只。分別隔離飼喂,觀察發(fā)病和死亡情況。對(duì)照動(dòng)物死亡,而中和組動(dòng)物不死,即證實(shí)該病料中含有與該抗血清相應(yīng)的病毒。本法亦可用于毒素(如毒毒素)的鑒定和分型。
(二)固定血清稀釋病毒法:
本法多將病毒作10倍遞增稀釋,分置2列試管,第一列加正常血清(對(duì)照組),第二列加待檢血清(試驗(yàn)組)。混合后,置37℃作用1h,將各管混合液分別接種選定的試驗(yàn)動(dòng)物,每一稀釋度用3~5只動(dòng)物。接種后,逐日觀察,并記錄其死亡數(shù),觀察結(jié)束后,計(jì)算LD50和中和指數(shù)(表7-1、表7-2),本法適用于大量檢樣的檢測(cè)。
本法多用以檢出待檢血清中的中和抗體,對(duì)病毒而言,通常中和指數(shù)大于50者判為陽性,10~49為可疑,小于10為陰性。
(三)固定病毒稀釋血清法:
本法用以測(cè)定抗病毒血清的中和價(jià),將待檢血清2倍遞增稀釋,加等量已知毒價(jià)的病毒液(與血清混合后,每一接種劑量含病毒100LD50),搖勻后,置37℃作用1h,接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
注:
[1]接種劑量0.1ml,含病毒100LD50;
[2]系指與病毒混合后的稀釋度;
[3]分母為接種數(shù),分子為保護(hù)數(shù);
[4]PD50為半數(shù)保護(hù),其計(jì)算法同LD50的計(jì)算。
(四)空斑減少法:
在細(xì)胞培養(yǎng)上進(jìn)行病毒中和試驗(yàn),近年來多采用空斑減少法。先將病毒稀釋成適當(dāng)濃度,使每0.2ml含80個(gè)~100個(gè)PFU(空斑形成單位),與不同稀釋度的待檢血清等量混合,置37℃作用1h~2h,分別測(cè)定PFU,使空斑減少50%血清稀釋度即為該血清的中和價(jià)。
注:
[1]血清用4倍遞增稀釋;
[2]空斑減少50%的血清稀釋度,其計(jì)算法同LD50的計(jì)算。
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