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厭氧菌的分離與鑒定

基本信息

  • 專科分類： 生長(zhǎng)發(fā)育檢查
  • 檢查分類： 生化檢查
  • 適用性別： 男女均適用
  • 是否空腹： 　空腹
  • 手術(shù)參考價(jià)： 35元
  • 科　室： 生長(zhǎng)發(fā)育檢查

厭氧菌的分離與鑒定檢查簡(jiǎn)介

厭氧菌的分離與鑒定是對(duì)氧敏感度高的細(xì)菌進(jìn)行分離與鑒別的試驗(yàn)，因?yàn)閰捬跷⑸镌谧匀唤绶植紡V泛，種類繁多，其生理作用日益受到人們的重視。專性厭氧菌，對(duì)氧氣非常敏感，因此，他們的分離、培養(yǎng)及活菌計(jì)數(shù)的關(guān)鍵是提供無氧和低氧化還原電勢(shì)的培養(yǎng)環(huán)境。

厭氧菌的分離與鑒定檢查過程

分離

(1)編號(hào)

取五支無菌水試管，分別用記號(hào)筆標(biāo)明10-1、10-2……10-5。

(2)稀釋

在無氧無菌的超凈厭氧手套箱中的條件下，用無菌注射器吸取1mL混合均勻的液體樣品，加入裝有預(yù)還原生理鹽水的厭氧試管中，用震蕩器將其混合均勻，制成10-1稀釋液。用無菌注射器吸取1mL10-1稀釋液至另一裝有9mL生理鹽水的厭氧試管中，制成10-2稀釋液。依此進(jìn)行10倍系列稀釋，至10-6，制成不同樣品稀釋液。通常選10-4、10-5、10-6三個(gè)稀釋度進(jìn)行滾管計(jì)數(shù)。

(3)滾管分離

1)滾管

將無氧無菌的瓊脂培養(yǎng)基在沸水浴中溶化，置46-50℃恒溫的水浴中，待用，當(dāng)培養(yǎng)基從瓶中取出時(shí)，要用N2在培養(yǎng)基內(nèi)中充氣。再在試管中用N2充氣，趕走所有管內(nèi)空氣，然后把培養(yǎng)基加入管內(nèi)，立即塞上瓶塞。待瓶塞塞入管內(nèi)，及時(shí)拔出充氣針頭。用無菌注射器吸取10-4、10-5、10-6三個(gè)稀釋度各0.1mL，分別注入待用的試管中，然后將其平放于盛有冰水的瓷盤中迅速滾動(dòng)，帶菌的溶化瓊脂在試管內(nèi)壁會(huì)即刻形成凝固層。

2)分離純化

生成的菌落需挑取出來，鏡檢其形態(tài)及純度。如尚未獲得純培養(yǎng)物，需再次稀釋滾管，并再次挑取菌落，直至獲得純培養(yǎng)物為止。待挑取的單菌落預(yù)先在放大鏡下觀察確定，做好標(biāo)記。然后將培養(yǎng)基試管固定于適當(dāng)?shù)闹Ъ苌希蜷_試管膠塞，同時(shí)迅速將氣流適當(dāng)、火焰滅過菌的氮?dú)忾L(zhǎng)針頭插入管內(nèi)。同時(shí)，另一液體厭氧管去掉膠塞插入另一滅過菌的通氣針頭。將準(zhǔn)備好的彎頭毛細(xì)管小心插入固體培養(yǎng)基內(nèi)，找準(zhǔn)待挑菌落，輕輕吸取，轉(zhuǎn)移至液體試管內(nèi)，加塞。37℃培養(yǎng)，培養(yǎng)24h或更長(zhǎng)時(shí)間或待培養(yǎng)液混濁后檢查已分離培養(yǎng)物的純度。

3)劃線分離

將試管橡皮塞的一端在火焰上灼燒一下，挨著打氣針塞住管口，在針頭快速取下前，通氣15-20s，管口一端在火焰上燒片刻。旋緊管塞，劃線后的卷管直立保溫，使用CO2:H2=80:20,因?yàn)镃O2比空氣重，開啟后管塞不致有空氣殘留。劃線后的滾管，置34-37度下培養(yǎng)，便可長(zhǎng)出菌落。

菌種的鑒定

1糖發(fā)酵試驗(yàn)

糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)是最常用的生化反應(yīng)，在腸道細(xì)菌鑒定上尤為重要。絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖類作為碳源和能源，但是它們?cè)诜纸馓堑哪芰ι嫌泻艽蟛町悾行┘?xì)菌能分解糖并產(chǎn)酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和氣體(如氫、甲烷、二氧化碳等);有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。例如大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣;傷寒桿菌能分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不能分解乳糖;普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能分解乳糖。酸的產(chǎn)生可以利用指示劑來斷定。在配制培養(yǎng)基時(shí)預(yù)先加入溴甲酚紫[pH5.2(黃色)—6.8(紫色)]，當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，可使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色。氣體的產(chǎn)生可由發(fā)酵管中倒置的德漢氏小管中有無氣泡來證明。

具體實(shí)驗(yàn)步驟：

①將菌液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，之后在無菌環(huán)境下，取一定量的稀釋液注入生化鑒定管中，用無菌封口膜封口。

②將接種后的鑒定管放入?yún)捬豕拗校渥愕獨(dú)夂蠓湃?7℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

③24h后觀察各管中液體顏色變化及產(chǎn)氣情況。

2蛋白質(zhì)分解實(shí)驗(yàn)

①將菌液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，之后在無菌環(huán)境下，取一定量的稀釋液注入生化鑒定管中，用無菌封口膜封口。

②將接種后的鑒定管放入?yún)捬豕拗校渥愕獨(dú)夂蠓湃?7℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

③24h后各管分別進(jìn)行米倫氏反應(yīng)、吲哚反應(yīng)、黃色反應(yīng)和坂口反應(yīng)等。

3淀粉水解實(shí)驗(yàn)

①將菌液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，之后在無菌環(huán)境下，取一定量的稀釋液注入生化鑒定管中，用無菌封口膜封口。

②將接種后的鑒定管放入?yún)捬豕拗校渥愕獨(dú)夂蠓湃?7℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

③24h后于各管中加入適量盧戈氏碘液觀察淀粉的水解情況。

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推薦問答

問乳腺結(jié)節(jié)應(yīng)如何治療？
答

乳腺結(jié)節(jié)的治療需根據(jù)結(jié)節(jié)性質(zhì)、大小及患者具體情況綜合考慮。若結(jié)節(jié)為良性，且無癥狀或癥狀輕微，可采取觀察等待策略，定期進(jìn)行超聲檢查監(jiān)測(cè)結(jié)節(jié)變化。若結(jié)節(jié)較大或癥狀明顯，可考慮手術(shù)切除。若結(jié)節(jié)性質(zhì)不明，需進(jìn)行活檢以明確診斷。若為惡性結(jié)節(jié)，需根據(jù)腫瘤分期、分子分型等制定個(gè)體化治療方案，可能包括手術(shù)、放療、化療、內(nèi)分泌治療及靶向治療等。治療過程中需密切監(jiān)測(cè)患者病情變化，及時(shí)調(diào)整治療方案。

問腎結(jié)石能否進(jìn)行體外碎石？
答

腎結(jié)石患者是否能夠進(jìn)行體外碎石治療，取決于結(jié)石的大小、位置、成分以及患者的整體健康狀況。體外沖擊波碎石（ESWL）是一種非侵入性治療方法，適用于直徑小于2厘米的腎結(jié)石。對(duì)于較大的結(jié)石或位于特殊位置的結(jié)石，可能需要其他治療方法，如經(jīng)皮腎鏡碎石術(shù)或腹腔鏡手術(shù)。此外，某些類型的結(jié)石，如胱氨酸結(jié)石，對(duì)體外沖擊波碎石的反應(yīng)可能較差。因此，是否進(jìn)行體外碎石治療需要根據(jù)患者的具體情況和醫(yī)生的專業(yè)評(píng)估來決定。

問抗生素眼藥水有哪些？
答

抗生素眼藥水是一類用于治療眼部感染的局部用藥，主要包括氟喹諾酮類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類等。氟喹諾酮類如左氧氟沙星、諾氟沙星眼藥水；氨基糖苷類如慶大霉素、妥布霉素眼藥水；大環(huán)內(nèi)酯類如紅霉素、阿奇霉素眼藥水。此外，還有氯霉素、四環(huán)素等抗生素眼藥水。這些藥物通過抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，減少眼部炎癥反應(yīng)，促進(jìn)眼部組織修復(fù)，達(dá)到治療眼部感染的目的。患者在使用時(shí)應(yīng)遵醫(yī)囑，注意藥物的適應(yīng)癥和禁忌癥，以確保用藥安全有效。

問尿路感染應(yīng)該用什么藥治療？
答

尿路感染的治療需根據(jù)病原體類型、感染部位及患者個(gè)體情況綜合考慮。對(duì)于細(xì)菌性尿路感染，通常首選抗生素治療，如氟喹諾酮類、頭孢類或磺胺類藥物等。對(duì)于非細(xì)菌性尿路感染，如真菌性或病毒性感染，則需選擇相應(yīng)的抗真菌或抗病毒藥物。治療過程中，醫(yī)生會(huì)根據(jù)患者的反應(yīng)和病情變化調(diào)整藥物種類和療程。同時(shí)，患者需保持充足水分?jǐn)z入，以幫助沖洗尿路，減少細(xì)菌滯留。在治療期間，應(yīng)避免使用可能刺激尿路的化學(xué)物品，如某些清潔劑或香料。

問嘴巴張不開是怎么回事？
答

嘴巴張不開可能是由多種因素引起的，包括但不限于顳下頜關(guān)節(jié)紊亂、肌肉緊張或疼痛、牙齒問題、感染或炎癥等。顳下頜關(guān)節(jié)紊亂可能導(dǎo)致關(guān)節(jié)疼痛和功能受限，肌肉緊張或疼痛可能是由于壓力或過度使用導(dǎo)致。牙齒問題，如智齒問題或牙齒感染，也可能導(dǎo)致張口困難。感染或炎癥可能影響口腔組織，導(dǎo)致腫脹和疼痛，從而限制嘴巴的開合。針對(duì)具體原因，治療方法可能包括物理治療、藥物治療、牙齒矯正或手術(shù)等。建議患者及時(shí)就醫(yī)，以便進(jìn)行詳細(xì)檢查和針對(duì)性治療。

問脾厚和脾大是一回事嗎？
答

脾厚和脾大并非完全相同的概念。脾厚指的是脾臟的厚度增加，而脾大則是指整個(gè)脾臟體積的增大。脾厚可能是由于脾臟局部的炎癥、纖維化或其他病變導(dǎo)致，而脾大則可能是由于多種原因引起的全身性病理狀態(tài)，如肝硬化、血液系統(tǒng)疾病等。兩者在臨床表現(xiàn)和診斷上有所區(qū)別，但都可能提示潛在的健康問題，需要進(jìn)一步的檢查和評(píng)估以明確診斷和制定治療方案。

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