三級(jí)甲等綜合醫(yī)院國營
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取材:血液
腺病毒抗體的測定原理:免疫熒光法:熒光色素具有能和抗體蛋白分子結(jié)合并保持抗體活性的特性,即抗原抗體結(jié)合成免疫復(fù)合物的特性,通過觀察熒光色素而檢測相應(yīng)的腺病毒組特異性抗原。
試劑:
(1)pH7.4的PBS液。
(2)熒光抗體。
操作方法:
(1)直接法:熒光標(biāo)記抗體直接與病毒抗原反應(yīng)。此方法簡便、快速、特異性高,但敏感性差。
①固定:將病毒抗原滴玻片上,冷丙酮中固定10min,并作陽性和陰性對照。
②洗滌:pH7.4的PBS液洗滌3次。
③染色:滴加相應(yīng)的熒光抗體,置于濕盒中37℃,作用30min。
④洗滌:pH7.4PBS液洗滌3次。
⑤晾干:封片觀察。封片用80%的甘油和10%0.01mol/LpH7.4的PBS液。
(2)間接法:病毒抗原先與第一抗體結(jié)合(病人恢復(fù)期血清或病毒免疫動(dòng)物血清)再與第二抗體(熒光抗體)反應(yīng)。該法敏感性強(qiáng)。
①固定:待檢病毒抗原標(biāo)本按一定稀釋度滴于玻片上,同時(shí)作陽性和陰性對照,冷丙酮中固定10min。
②洗滌:pH7.4PBS液洗3次。
③加入一定稀釋度的第一抗體,濕盒中37℃作用30min。
④洗滌:pH7.4PBS液洗3次。
⑤加第二抗體(熒光抗體),濕盒中37℃作用30min。
⑥洗滌:pH7.4PBS液洗3次。
⑦晾干、封片、觀察。
(3)結(jié)果判定:熒光顯微鏡鏡檢,根據(jù)特異性的熒光強(qiáng)度判定結(jié)果,用加減號(hào)表示:
(-):無熒光。
(±):極弱的可疑熒光。
(+):熒光較弱,但清晰可見。
(++):熒光明亮。
(+++~++++):熒光閃亮,且范圍廣泛。
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