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(1)補(bǔ)體和溶血素的滴定。
①取補(bǔ)體1ml,加BBS9ml,依次稀釋成1∶20,1∶30,1∶40,1∶50,1∶60,1∶80,1∶100,1∶200,1∶400,同時(shí)取50%的溶血素0.2ml,加BBS9.8ml,即為1∶100的溶血素,然后繼續(xù)稀釋成1∶800,1∶1600,1∶3200,1∶6400。
②采取方陣排列試管,縱行各管加不同濃度的補(bǔ)體0.1ml,橫排各管加溶血素0.1ml(皆應(yīng)從最高稀釋度加起)混勻后,各管加BBS0.2ml,補(bǔ)體和溶血素對(duì)照管各加BBS0.3ml,最后在各管中加2%羊紅細(xì)胞0.1ml。各管總量為0.5ml,搖勻,放37℃水箱中30min,觀察結(jié)果。茲舉一例說明(表1):
以完全溶血的補(bǔ)體和溶血素最高稀釋度為各自的單位。上表(表1)中溶血素1∶3200為一個(gè)溶血素單位,補(bǔ)體1∶80為一個(gè)補(bǔ)體單位。在實(shí)際應(yīng)用時(shí),溶血素用2u(3200÷2=1600),補(bǔ)體用2.5u(80÷2.5=32)。
(2)正式試驗(yàn):
①用V型微量反應(yīng)板操作,每份標(biāo)本作一個(gè)試驗(yàn)孔,一個(gè)血清對(duì)照孔。各孔內(nèi)先加BBS0.025ml。
②用稀釋棒蘸取血清(0.025ml)加入第一孔,旋轉(zhuǎn)后移入第二孔,共八孔,如此可得1∶2~1∶256稀釋。
③按下表(表2))加入各試劑:
(3)結(jié)果判斷:凡對(duì)照組各管的結(jié)果應(yīng)符合以下情況,否則應(yīng)重做。
補(bǔ)體對(duì)照管:2.5u=0,1u=0~±,0.5u=3~4。羊紅細(xì)胞對(duì)照管:4。抗體對(duì)照管:0。陰性對(duì)照管;1∶2~1∶256=0。陽性對(duì)照管:同一份陽性血清,每次結(jié)果應(yīng)一致。
當(dāng)各測(cè)定管反應(yīng)最強(qiáng)一管仍為±報(bào)告可疑,1~4報(bào)告陽性。如測(cè)定管和血清對(duì)照管均抗補(bǔ)體,全部測(cè)定管皆為0,報(bào)告陰性。
檢查抗體的方法與檢查抗原的方法一樣,只是改用4個(gè)單位已知抗原,藉以測(cè)定被檢血清。
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