三級(jí)甲等綜合醫(yī)院國(guó)營(yíng)
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(1)二乙酰-肟法:
①尿素不能直接與二乙酰-肟反應(yīng),加入二乙酰-肟和強(qiáng)酸的目的是生成能與之反應(yīng)二乙酰。加入Fe3+(或Cd2+)是為消除反應(yīng)過(guò)程中生成的羥胺的干擾,硫氨脲可使反應(yīng)的敏感度提高20倍。以前許多書刊介紹的方法是將二乙酰-肟與硫氨脲配在一起。但兩者可生成針狀黃色物質(zhì),用硫氨脲配在酸試劑中克服了這一缺點(diǎn)。
②酸濃度與吸光度呈正相關(guān),故酸濃度要準(zhǔn)確。所用試管口徑,放入沸水中的傾斜角度要盡量一致,水液面要在試管內(nèi)液面之上,煮沸時(shí)間以放入試管重新沸騰計(jì)。最好每次測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控。觀察尿素動(dòng)態(tài)變化時(shí),應(yīng)囑患者恒定食入蛋白,并空腹采血。樣本不能立即分析時(shí),可提取血清(或血漿)于密封樣杯中,置4℃存放可穩(wěn)定7天。結(jié)果大于20mmol/L時(shí),樣本改為10μl,結(jié)果乘以2。
③此法雖然加入硫氨脲和鎘離子,在一定程度上增進(jìn)了顯色強(qiáng)度和色澤穩(wěn)定性,但仍有褪色現(xiàn)象(每小時(shí)約5%),所以,煮沸加熱顯色冷卻后,應(yīng)及時(shí)比色。
④所用20μl加樣器務(wù)必校正無(wú)誤后方可使用。
⑤血漿(清)中尿酸、肌酐、氨基酸等含氮物對(duì)本試驗(yàn)無(wú)干擾,溶血可能結(jié)果偏高,黃疸可能結(jié)果偏低。
⑥血漿(清)尿素含量與進(jìn)食的蛋白質(zhì)含量有密切的關(guān)系。在高蛋白飲食時(shí),血漿(清)中的尿素含量可明顯升高,而低蛋白飲食時(shí),則含量顯著降低。
(2)酶偶聯(lián)速率法:
①該法最常出現(xiàn)的問(wèn)題是試劑失效或反應(yīng)系統(tǒng)被污染。試劑中最不穩(wěn)定的是NADH和谷氨酸脫氫酶。在分析過(guò)程中應(yīng)注意以下幾個(gè)方面:如用血漿則不能用含氟化合物或NH4+的抗凝劑,前者可抑制尿素酶活性,后者則可參與反應(yīng)。
②試劑空白吸光度應(yīng)大于1.2A,否則說(shuō)明NADH被氧化。同種試劑、儀器,在分析條件不變的情況下,測(cè)定得F值應(yīng)相對(duì)恒定,否則說(shuō)明試劑失效。
③復(fù)溶試劑勿振動(dòng),以免酶變性失活。必須用無(wú)氨水復(fù)溶試劑。試劑杯、樣品杯、反應(yīng)杯要無(wú)氨、潔凈、無(wú)酸堿污染,應(yīng)每次定標(biāo),并跟測(cè)質(zhì)控血清。
一般無(wú)禁忌人群。
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