血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移同工酶

血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移同工酶注意事項(xiàng)

(1)ALT測(cè)定中存在著兩個(gè)副反應(yīng)：

①血清中存在的α-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH：

②血清中谷氨酸脫氫酶(GLDH)增高時(shí)，在有氨存在的條件下，亦能消耗NADH：

(上述副反應(yīng)都能消耗NADH，使340nm處吸光度下降值(-△A/min)增加，使測(cè)定結(jié)果偏高。因此，在單試劑法中必須要有足量的LDH(如2000U/L，Scandinavia法;1200U/L，IFCC)，才能保證α-酮酸(尤當(dāng)遇到丙酮酸含量升高的標(biāo)本)引起的副反應(yīng)在規(guī)定的延滯期內(nèi)進(jìn)行完畢。這樣，LDH含量高，試劑成本提高。目前，推薦雙試劑法，因孵育期長，能有效地消除干擾反應(yīng)，提高測(cè)定

準(zhǔn)確性，是ALT測(cè)定的首選方法。雙試劑法可適當(dāng)?shù)亟档驮噭┲蠰DH的用量。至于NH4+的干擾，除嚴(yán)重肝病時(shí)血清谷氨酸脫氫酶活性增高和血氨增高時(shí)外，一般說血清中NH4+的含量甚微，此干擾反應(yīng)不大。但LDH原試劑往往是用飽和硫酸銨配制的，廠方在使用前必須經(jīng)過嚴(yán)格的脫氨處理。

(2)血清ALT活性>1000/L(37℃)的樣品，或讀數(shù)開始時(shí)吸光已很低的樣品(因ALT活性很高，NADH在讀數(shù)開始前的溫育期內(nèi)已經(jīng)耗盡所致)，須用0.9%生理鹽水溶液作適當(dāng)稀釋后重新測(cè)定，測(cè)定結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

(3)IFCC推薦法中使用了ALT的輔酶P-5'-P，即使正常血清試劑中加或不加P-5'-P測(cè)得的ALT活性也有明顯差別(表3)。在某些病理情況下(如VitB嚴(yán)重缺乏)不加P-5'-P將導(dǎo)致ALT測(cè)定結(jié)果嚴(yán)重偏低。加入后則可使ALT活性明顯升高。由于種種原因，目前市售ALT測(cè)定試劑盒多末加入P-5'-P。為使同一實(shí)驗(yàn)室的ALT測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定，加或不加P-5'-P的ALT測(cè)定試劑不宜混用。

(4)ALT測(cè)定試劑中使用Tris緩沖液為宜。據(jù)報(bào)道：①NADH在Tris緩沖液中穩(wěn)定性較高;②P-5'-P在Tris緩沖液中，顯示出更有效的激活作用。

(5)試劑空白測(cè)定值：以蒸餾水代替血清，測(cè)定ALT活力單位，規(guī)定測(cè)定值應(yīng)小于5U/L。試劑空白的讀數(shù)是由于工具酶中的雜酶及NADH自發(fā)氧化所引起。在報(bào)告結(jié)果時(shí)應(yīng)扣去每批試劑的空白測(cè)定值。

(6)正常新生兒ALT水平比成年人約高2倍，出生后約3個(gè)月降至成年人水平。新生兒，尤其未成熟兒，肝細(xì)胞膜通透性較大，ALT從肝細(xì)胞滲入血漿，使血清ALT水平升高。

(7)酶連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定中，要求使用的分光光度計(jì)，帶寬≤6nm，比色杯光徑1.00cm，具有30℃或37℃恒溫裝置，能自動(dòng)記錄吸光度的動(dòng)態(tài)變化。

(8)血清不宜反復(fù)冰凍保存，以免影響酶活性。血清置4℃冰箱1周，酶活性無顯著變化。不推薦冰凍保存ALT測(cè)定標(biāo)本。