三級(jí)甲等綜合醫(yī)院國(guó)營(yíng)
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(1)血清中LD在其底物存在下(血清中含有一定量的乳酸)也可還原NAD+為NADH,產(chǎn)生高空白值。本法中加入丙酮酸鈉,抑制LD活性,可有效地降低空白吸光度。
(2)反應(yīng)混合物中各成分濃度為:
3α-HSD5U/L
黃遞酶500U/L
NAD+1mmol/L
NTB0.2g/L
pH7.50
(3)反應(yīng)混合物的吸光度受蛋白質(zhì)影響,故甘氨膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液配制于混合血清中?;旌涎逯性心懼峒捌渌赡軈⑴c反應(yīng)的物質(zhì)需設(shè)P管消去。
(4)3α-HSD制品中含有二硫蘇糖醇(di-thiothreitol,DTT),酶制劑用量過(guò)多時(shí)可影響NTB的還原。
(5)本法線性達(dá)250μmol/L。如血清膽汁酸超過(guò)此值應(yīng)作適當(dāng)稀釋。
(6)NoigenET-180是一種非離子表面活性劑,化學(xué)名為聚氧乙烯油醚(polyoxy-ethyleneolylether),為日本京都Dai-ichiKo-gyoSeiyaku公司產(chǎn),加入反應(yīng)混合物中可防止沉淀,不影響3α-HSD及黃遞酶活性,不影響本測(cè)定系統(tǒng)的敏感性。
(7)血清中的TBA含量較低,標(biāo)本中含大量的干擾物質(zhì),其中最主要的是乳酸脫氫酶(LDH)。LDH能影響NAD+的還原反應(yīng),由LDH生成的NADH往往比由3α-HSD催化TBA參與的反應(yīng)生成的NADH量要大的多。由于各類(lèi)肝炎均可引起血清LDH升高,因此測(cè)定中必須消除LDH的影響,方法有:血清67℃加溫30min、加草酸作為L(zhǎng)DH的封閉劑、堿或酸處理、或用丙酮酸鈉抑制LDH活性等,其中以丙酮酸鈉法最好。其它還原性物質(zhì)的干擾通過(guò)設(shè)立雙試劑,樣品先和不加3α-HSD的體系孵育,使樣品中的干擾物質(zhì)反應(yīng),然后加入3α-HSD,使TBA反應(yīng),可排除干擾。
不合宜人群:一般無(wú)不適合的人群。
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