三級甲等綜合醫(yī)院國營
北京協(xié)和醫(yī)院是集醫(yī)療、教學、科研于一體的現(xiàn)代化綜合三級甲等醫(yī)院,是國家衛(wèi)生健康委指定的全國疑難重癥診治指導中心,最早承擔高干保健和外賓醫(yī)療任務的醫(yī)院之一,也是高等醫(yī)學教育和住院醫(yī)師規(guī)范化培訓國家 級
流式細胞DNA分析:直接用可產(chǎn)生熒光的核酸染料(如碘化丙啶)對胸水中細胞進行染色,流式細胞儀分析胸水細胞的DNA含量、細胞周期分布和DNA倍體數(shù).
流式細胞術常規(guī)檢測時的樣品制備:
(一)直接免疫熒光標記法
取一定量細胞(約1X106細胞/ml),直接加入連接有熒光素的抗體進行免疫標記反應(如做雙標或多標染色,可把幾種標記有不同熒光素的抗體同時加入),孵育20~60分鐘后,用PBS(pH7.2~7.4)洗1~2次,加入緩沖液重懸,上機檢測。本方法操作簡便,結果準確,易于分析,適用于同一細胞群多參數(shù)同時測定。雖然直標抗體試劑成本較高,但減少了間接標記法中較強的非特異熒光的干擾,因此更適用于臨床標本的檢測。
(二)間接免疫熒光標記法
取一定量的細胞懸液(約1X106細胞/ml),先加入特異的第一抗體,待反應完全后洗去未結合抗體,再加入熒光標記的第二抗體,生成抗原-抗體-抗抗體復合物,以FCM檢測其上標記的熒光素被激發(fā)后發(fā)出的熒光。本方法費用較低,二抗應用廣泛,多用于科研標本的檢測。但由于二抗一般為多克隆抗體,特異性較差,非特異性熒光背景較強,易影響實驗結果。所以標本制備時應加入陰性或陽性對照。另外,由于間標法步驟較多,增加了細胞的丟失,不適用測定細胞數(shù)較少的標本。
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